小鼠角质细胞分离&培养

知凡生物 2020-11-17 06:18:58

角质细胞的主要作用

角质层的细胞含有8-10nm的角蛋白丝,形成一种天然屏障,可以防止大自然中的各种物理、化学、微生物和水的入侵。也能防止紫外线摄入皮肤深层。

角质细胞生长因子

角质细胞生长因子来源于角质形成细胞,对上皮细胞具有强促使、分裂原活性的一种生长因子,结构上与成纤维细胞生长因子相近,角质细胞生长因子对组织损伤具有明显的促进修复和保护作用。


实 验 步 骤

1) 将1~2天龄新生裸鼠窒息后,置于培养皿中,用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠,流水彻底冲洗,然后用70%乙醇洗两次。小鼠应立即使用,若待处理的小鼠数量较多,可置冰上30min。

2)去除小鼠的四肢和尾巴。

3)将小鼠从尾巴至鼻子的皮肤作一简单切口,用大鼠牙齿镊轻轻将整个身体的皮肤剥下,用一把镊子夹住身体,另一把镊子拉开皮肤。

4)将剥下的皮肤组织置于放在冰上的无菌培养皿表面,直至所有的皮肤收集完毕。

5)用2把大鼠牙齿钳夹住皮肤组织,在含2.5%胰蛋白酶的HBSS无菌培养皿中漂洗皮肤组织(真皮组织在下),然后置4℃过夜。表皮不应淹没在胰蛋白酶液中。

6)从胰蛋白酶处理液中取出组织,将表皮面朝下置于干燥的无菌细胞培养皿表面。表皮易于贴附于塑料上,真皮组织用组织钳扯去,鼠龄与此有影响,天龄越大,去其表皮越困难。

7)用剪刀小心地将表皮残留物剪碎,置于含“常规”培养液(MEM含10%FCS,2~4mmol/L L-谷氨酰胺;每5只小鼠皮肤用10ml)的无菌烧瓶中,磁力搅拌器37℃剧烈搅拌45min。

8)用4层无菌Nitex纱布(16um孔,Martin提供)过滤液体。当其他细胞通过时角质层细胞留在纱布的表面。

9)用培养瓶将细胞洗下,培养基的用量约为一块皮肤10ml,将细胞接种于塑料细胞培养瓶中或玻璃盖玻片上,37℃培养4~12h。

10)4~12h后观察培养皿表面的细胞群。

11)将细胞转移至低钙培养液,角质细胞将开始繁殖。这种转移防止细胞的分层。低钙液由MEM(无钙)和10%螯合的FCS组成。螯合的血清按下法准备:每50ml血清需20g树脂。将树脂置于水中,40g/L,pH约为7.4,放置滤纸于漏斗上,过滤树脂。加入树脂于FCS中,搅拌60min。接着过滤使血清变得清亮,再用0.45ug滤纸除菌。后者过滤过程较慢。需用购买的商品化滤器。完全培养液中钙离子浓度约为0.09mmol/L,与0.15mmol/L钙浓度相比这是普通培养液。

注 意 事 项

一、小鼠角质细胞在低钙培养液中维持至1周时间,尽管细胞活力有所降低。低钙、无血清培养液培养角质细胞。胶质细胞在这种培养液中能保存较长时间,并在多数情况下进行几次分裂。为了诱导角质细胞分层,应向细胞中加入正常水平的钙。

二、最好使用一次性塑料组织培养器材,而不是玻璃器材。若确需使用玻璃器材,应用酸浸泡后再行高压灭菌。需要使用的器材还有大叔牙齿钳、尖解剖剪、活组织吸取器。上述器材应高压灭菌或在95%乙醇中浸泡、烧灼。

   §   产 ● 品 ● 简 ●    §   

① NocardRid(支原体去除剂)

(1)将Nocard Rid与完全培养液按1:800~1000比例稀释,加入细胞正常培养;

(2)根据细胞污染的严重程度,处理3~6次即可完全清除细胞支原体污染问题。


② PreNocardRid(支原体预防剂)

(1)将PreNocard Rid与完全培养液按1:1000~2000比例稀释,加入细胞正常培养;

(2)有效预防和抑制细胞出现支原体污染。


③ MycoTest Kit(支原体检测试剂盒)

MycoTest Kit是利用降落聚合酶链式反应技术(TD-PCR)对支原体16S rRNA 基因高度保守区域特异性片段进行扩增检测。该方法灵敏度高,特异性强,可用于各种生物材料(如细胞培养基、实验动物分泌物、动物血清等)支原体感染的检测。


④ Nabact™ Rid(黑胶虫去除剂)

在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动(类似布朗运动),这就是黑胶虫。

(1)推荐Nabact Rid的稀释比例为1:500-800,例如:5 mL培养基加入10 μL的Nabact Rid;

(2)弃去旧的培养基,用PBS将细胞清洗干净,再加入新鲜的含有Nabact Rid的培养基,2天1次,连续处理3个周期。


⑤ PreNabactRid(黑胶虫预防剂)

(1)推荐PreNabact Rid用培养液稀释的使用比例为1:800-1000,加入细胞培养;

(2)有效预防细胞出现黑胶虫污染。


⑥ Candida™Rid(念珠菌清除剂)

Candida Rid 通过特异性的破坏真菌细胞壁的结构,让真菌细胞失去固有形态及完整性,从而影响念珠菌属的正常代谢、离子交换和渗透压,让细胞彻底摆脱念珠菌的困扰,确保细胞的健康生长。

(1) 用PBS冲洗细胞3~5次,每次都从一个方向冲洗倒掉;

(2)推荐将Candida Rid与完全培养液按1:500比例稀释,加入细胞正常培养;


⑦ PaebaclRid(杆菌去除剂)

杆菌(Bacillus Cohn)呈杆状,革兰氏染色阳性、阴性或可变,以周生鞭毛运动。当细胞出现杆菌及常见细菌污染,且对各种抗生素都有很强的耐药性,很难清除,且增殖很快跟细胞竞争营养,培养液很快会变混浊。

(1)发现细胞有杆菌及常见细菌污染,弃掉培养基,用pbs清洗3遍;

(2)然后按1:1000 比例加入Paebacl Rid 试剂,即:边加边摇匀;

(3)每天处理一次,Paebacl Rid 连续处理三天,即可完全清除杆菌污染。


⑧ ZoFtic™细胞房除菌剂

(1)在细胞房及实验室空间,喷两层层即可快速杀灭常见污染源;

(2)喷洒本品后,需将细胞房或实验室密闭10-20min后使用。


ZoFtic™培养箱除菌剂

(1)在CO2培养箱内壁及空间,喷三层即可快速杀灭常见污染源,也可对环境空气灭菌;

(2)经试验验证,处理培养箱污染对常见细胞培养无任何影响,无需将细胞移出培养箱;

(3)建议CO2培养箱每1-2周处理一次。


ZoFtic™培养箱水盘抑菌剂

(1)首次使用,请先将培养箱水盘清洗干净,然后推荐使用培养箱除菌剂(NZF602)或75%酒精擦拭;最后按照1:100的比例向水盘中加入水盘抑菌剂处理过的水(即:1L水加入10 mL水盘抑菌剂);

(2)再次使用,可直接按照1:100的比例向水盘中加入本品,每7-10天处理一次。


ZoFtic™水浴锅抑菌剂

(1)直接按照1:1000的比例向水浴锅中加入本品,每7-10天处理一次。


联系方式:

南京知凡生物技术有限公司

Tel:025-68027363

QQ:1621855805

E-mail:sales@zfdows.com

Web:www.zfdows.com

Copyright © 江苏回收废材价格采购组@2017